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发布时间:2020-02-07 08:41:33
显色以下各步均在室温下进行。
(1)缓冲液I洗1min。
(2)用含2%正常羊和0.3%TritonX-100的缓冲液I孵育切片30min。
(3)用含1%正常羊和0.3%TronX-100的缓冲液I稀释羊抗Dig。
(4)将稀释液滴加在切片上,封口膜覆盖,湿盒内4℃孵育过夜。
(5)缓冲液I洗10min。
(6)缓冲液Ⅱ洗10min。
(7)加显色液,封口膜覆盖,避光室温孵育2~20h,随时镜检,当显色满意时入缓冲液Ⅲ终止显色。
显色液临用前配,其配方为:①NBT 45μl;②X-Phospllate液 35μl;③左旋咪唑 2.4mg;④缓冲液Ⅱ 加至10ml。
(8)常规脱水、透明、封固。
结果:杂交阳性信号为紫蓝色颗粒。
FISH选用的标本既可以是分裂细胞也可以是间期细胞。近年来,动物***原位杂交,随着FISH所应用的探针种类的不断增多,如DAPI /GFP/FITC/PI/Texas-Red等,使得普通的宽场荧光显微镜即可获得高质量的FISH信号。若采用多种方法标记DNA探针,故一次杂交可以同时观察多个探针的信号,使用数字成像系统(CCD/CMOS),分别多次摄取的信号储存在计算机内,通过软件系统的处理,终形成一个复合的多颜色的图像。
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