洋葱亚细胞***培养电话

发布时间：2020-03-22 07:12:08

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GaMYB2 在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析：采用***枪轰击的方法，用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击，暗培养过夜后，在激光共聚焦显微镜下进行观察，从图A 中可以看出对照GFP空载体在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光，为组成型表达；从图B 中发现GaMYB2-GFP 的融合表达载体只能在细胞核中能看到绿色荧光，这进一步证明该蛋白不具有跨膜蛋白结构，***在细胞核中，具有转录因子的一般特征。

以拟南芥金属离子转运体***AtZIP1(GenBank登录号:AAC24197)的氨基酸序列为信息探针,从水稻(Oryza sativa L.)中分离得到OsZIP7a和OsZIP8两个锌铁转运体***,OsZIP7a和OsZIP8分别编码384和390个氨基酸残基的产物。OsZIP7a和OsZIP8与ZIP家族成员有着高度的同源性,均包含8个跨膜区,有着高度保守的ZIP结构,在第3和第4跨膜区之间存在一个可变区,可变区富含组氨酸。半定量RT-PCR分析结果表明,OsZIP7a和OsZIP8在水稻根、茎、叶和幼穗等***中均呈低水平表达;在缺铁处理时,OsZIP7a***在水稻幼苗根部的表达量增多,而在地上部的表达未明显增多;在缺锌处理的水稻幼苗中,OsZIP8***的表达量显著增多。构建OsZIP7a::GFP瞬时表达载体,采用农介导法转化洋葱表皮细胞,结果表明,OsZIP7a::GFP***于洋葱表皮细胞的质膜上。构建酵母表达载体pFL61-OsZIP7a和pFL61-OsZIP8,利用醋酸锂方法分别转入酵母双突变株fet3fet4DEY1453和zrt1zrt2ZHY3中,设pFL61空载体为阴性对照,分别在低铁和低锌的酵母YPD培养基中进行酵母功能互补实验。

采用根***农介导的方法,以农介导丝状***遗传转化的载体PCH-sGFP对尖孢镰刀菌甘蓝专化型两个生理小种进行转化,该载体含有报告***—绿色荧光蛋白***(gfp)和筛选***—潮磷酸转移酶***(hph).获得转化菌株后,经检测表明:T-DNA目的片段成功整合到枯萎病菌***组中,并且单孢继代培养6代后荧光蛋白仍能稳定遗传.对转化菌株的生长速度和致病力进行分析,结果表明:野生菌株和转化菌株在生长速度和致病力上没有显著差异.因此,转化菌株可用于甘蓝枯萎病菌的***病理学研究.

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