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洋葱亚细胞***方法电话「多图」

发布时间:2020-04-19 07:52:42        






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GaMYB2 在洋葱表皮细胞中的瞬时表达分析:采用***枪轰击的方法,用包裹质粒的金粉对洋葱表皮进行轰击,暗培养过夜后,在激光共聚焦显微镜下进行观察,从图A 中可以看出对照GFP空载体在整个洋葱细胞均能看到绿色荧光,为组成型表达;从图B 中发现GaMYB2-GFP 的融合表达载体只能在细胞核中能看到绿色荧光,这进一步证明该蛋白不具有跨膜蛋白结构,***在细胞核中,具有转录因子的一般特征。




大豆是重要的油料作物和植物蛋白质资源,在食品工业和农业生产中占有重要地位。大豆花叶病毒病分布非常广泛,是一种世界害,它严重影响大豆产量和外观品质。目前主要通过适当改变播种时期、选用抗病品种、防蚜等措施来降低大豆花叶病毒(***V)对大豆产量的影响,国内外从遗传工程角度来探索抗***V途径的还很少。类甜味蛋白(Thaumatin-like proteins,TLP)是第5类植物病程相关蛋白,在离体条件下具有很强的抑菌活性。以往关于类甜味蛋白的抗病研究都限于抗***,本研究探讨了其与花叶病毒抗性之间的相关性。GmTLP是本研究从大豆品种科丰1号中利用***V诱导的双向电泳技术分离的类甜味蛋白编码***,在大豆中存在两个拷贝,分别命名为GmTLP1和GmTLP2。本文对GmTLP1在植物中的表达及功能进行了初步研究。研究结果如下:1实时荧光定量PCR结果显示,在***V诱导4h、8h、24h、48h时,GmTLP1***在转录水平上的表达量明显上升,说明在mRNA水平上该***是响应***V诱导的,并且响应模式为双峰模式。 2半定量RT-PCR结果显示,GmTLP1在大豆根、茎、叶、荚中均有表达,只是荚中表达量相对低一些。3构建绿色荧光蛋白融合表达载体,利用根***农法转化洋葱表皮细胞进行瞬时表达。




以苎麻优良品系'5041-3'子叶作为受体,利用根***农介导法进行了绿色荧光蛋白***的遗传转化研究,农菌株为EHA105,重组质粒为pBINm-GFP5-ER。经农浸染后的子叶外植体经过共培养、选择培养、伸长培养和生根培养后再生出抗性植株,对抗性植株的再生过程进行了GFP荧光检测,结果表明,GFP***能在苎麻中强烈表达,证明GFP***能够在苎麻遗传转化中得到应用。对抗性植株的Southern杂交检测证实外源***已整合到苎麻***组中。


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